脈動真空滅菌滅菌效果驗證

備注說明 ：下面滅菌效果驗證中使用的 3 種無菌檢驗用培養基分別按各自培養基的使用說明配制并分裝在 6 分管中，每支分裝 6mL~8mL，蓋上膠塞經 116℃，1800s 高壓滅菌后無菌檢驗合格備用。

方法一 ：無菌（純粹）檢驗法

檢驗過程：將高壓滅菌后的 MEM 溶液（在室溫放置 24h，然后移至層流罩（局百環境）下用 5mL 無菌注射器取樣，并分別接種硫乙醇酸鹽流體培養基 2 支、胰酪大豆胨液體培養基1 支和酪胨瓊脂培養基 2 支，每支接種 0.2mL，分別在 25℃（硫乙醇酸鹽流體培養基、胰酪大豆胨液體培養基和酪胨瓊脂培養基各一支）和 37℃（硫乙醇酸鹽流體培養基和酪胨瓊脂培養基各一支）條件下培養 7 天，每天觀察并記錄檢驗結果。檢驗結果 ：觀察 7 天，無菌檢驗培養基中均無菌落生長，無菌檢驗合格。

方法二 ：細胞培養檢驗法

檢驗過程：在高壓滅菌后的 MEM 溶液中加 10% 胎牛血清后貼壁培養 MDBK 細胞，并 37℃培養 3 天，每天觀察細胞是否染菌。檢驗結果：3 天后細胞生長良好，顯微鏡鏡檢細胞輪廓清晰，視野干凈，未見雜菌。

方法三 ：生物指示劑驗證法

在高壓滅菌 MEM 溶液時選擇 3 個溫度可能最低的點分別放置生物指示劑 , 常用的生物指示劑嗜熱脂肪芽孢桿菌Bacillusstereathernophilus，其常規微生物耐熱參數 D 值為 121℃（1.5min~3.0min）。一同滅菌，滅菌結束后將滅菌后的生物指示劑及時取出并置于 56℃培養箱中培養 48h，隨后取出培養后的生物指示劑，觀察安瓿的內容物顏色，并與生物指示劑照片進行比較觀察。檢驗結果 ：48h 培養后的生物指示劑顏色呈紫紅色且澄清，說明該滅菌過程可有效殺滅孢子菌。

驗證結果重復上述驗證，連續三次，結果均符合要求。